Reactius per a la condensació de pèptids

Actualment, en la síntesi de pèptids, els mètodes d'activació carboxil s'utilitzen principalment per completar reaccions peptídiques. Els primers mètodes utilitzats van ser l'activació d'aminoàcids en clorurs àcids, azides, anhídrids simètrics i anhídrids àcids mixts. Tanmateix, a causa de l'existència de racemització d'aminoàcids en aquestes condicions, la perillositat dels reactius de reacció i la complexitat de la preparació, es van anar substituint progressivament per reactius de condensació posteriors, que es poden dividir en dos tipus segons les seves estructures.: Els principals reactius de condensació són: tipus carbodiimida, tipus sal d'oni (Uroni).

Principalment inclouen: DCC, DIC, EDC.HCl espera. utilitzar DCC dur a terme la reacció, a causa de la DCU, existeix DMF Té molt poca solubilitat i produeix precipitat blanc, per la qual cosa generalment no s'utilitza en la síntesi-sòlida. Tanmateix, com que és barat, es pot eliminar per filtració en síntesi en fase líquida-, i encara s'utilitza àmpliament. EDC.HCl A causa de la seva solubilitat en aigua, s'utilitza sovint en la connexió de polipèptids i proteïnes, i també té força èxit. No obstant això, un dels majors inconvenients d'aquest tipus de reactiu de condensació és que si s'utilitza sol, hi haurà més reaccions secundaries. Tanmateix, la investigació mostra que si s'afegeix durant el procés d'activació HOBt, aquests reactius HOAt poden controlar les reaccions secundaries a un rang molt baix. El mecanisme de reacció és el següent:

Figura 2 Mecanisme de reacció d'activació DIC

Els reactius de condensació tipus sal d'oni tenen una alta reactivitat i una velocitat ràpida, i ara s'utilitzen àmpliament, incloent-hi principalment: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP wait. Durant l'ús d'aquest reactiu, cal afegir una base orgànica, com ara diisopropiletilamina (DIEA), N- metilmorfolina (NMM), l'aminoàcid només es pot activar després d'afegir aquest reactiu. El mecanisme de reacció és el següent:

Les resines utilitzades en la síntesi de pèptids en fase sòlida-són generalment materials de poliestirè-divinilbenzè, amb mides que oscil·len entre 75 i 150 μm, el grau de reticulació-es d'entre l'1-2%, i la majoria de les que s'utilitzen ara són de l'1%, perquè en aquest grau d'encreuament,{8}DCM, la resina Té bones propietats d'inflació i té una estructura de xarxa-tridimensional, i les molècules de reactius es poden moure lliurement dins de la resina. La part més crítica de la resina és el braç de connexió, que està connectat a la resina en un extrem i serveix com a lloc de reacció a l'altre extrem. Les resines que s'utilitzen àmpliament actualment són: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA wait. en PAM, MBHA s'utilitza en l'estratègia BOC, perquè és molt estable a l'àcid, ha de ser HF, TFMSA Només es pot tallar en condicions d'àcid fort.

Un cop finalitzada la síntesi de pèptids en fase sòlida-, s'ha de seleccionar un reactiu de divisió adequat per escindir el pèptid de la resina, i després precipitar amb èter glacial, recollir el precipitat per centrifugació i HPLC Separar, purificar i liofilitzar-per obtenir el producte pèptid final.

A causa de les diferents resines i seqüències d'aminoàcids seleccionades, els mètodes de divisió seleccionats durant la divisió no són exactament els mateixos. Generalment, les condicions d'escissió es seleccionen en condicions àcides. Per al PAM, la resina MBHA, que s'utilitza generalment HF Cutting, p-cresol, p-mercaptofenol, anisol i altres reactius s'han d'afegir durant el procés de tall. I per a Wang, Rink-Amida, Trt Resin, que s'utilitza generalment el tall de TFA, afegiu etilenglicol, sulfur d'anisol, aigua, triisopropilsilà, fenol, etc. durant el procés de tall.

Aquests reactius additius s'utilitzen principalment com a reactius de captura de carbocations. L'objectiu és capturar el carbocatió generat durant la reacció de clivage i reduir les reaccions secundaries provocades per l'atac d'aquests ions carbocatió sobre algunes cadenes laterals d'aminoàcids. Els aminoàcids que tenen més probabilitats de produir reaccions secundaries inclouen: Trp, Tyr. La dosi del reactiu de tall és generalment de 10-15 ml/g de resina.

Relacions de tall d'ús habitual: HF/p-cresol/p-tiocresol (90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O (94/1/2,5/2,5), La reacció normalment es realitza a temperatura ambient 2 h-4h.

En la síntesi de pèptids en fase sòlida-, sovint ens trobem amb el problema de la fallada de la síntesi de pèptids o la baixa eficiència de la síntesi. El motiu principal es deu a la seqüència peptídica, perquè algunes seqüències peptídiques es formen a la resina. -El plegament canvia les propietats d'inflor de la resina i també pot enterrar els llocs actius de la reacció a la resina, cosa que dificulta que la reacció continuï. Els informes actuals ho indiquen

Utilitzeu dissolvents barrejats, DMSO/DMF, solució 6N Guanidina/DMF

Augmenteu la temperatura de reacció o utilitzeu el mètode de microones

Utilitzeu sals caotròpiques, LiCl, NaClO4 espereu.

Utilitzeu-ne altres amb millors propietats d'inflor PEG-resina PS, alhora que reduïu la càrrega de resina (0,05-0,2 mmol/g)

​